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RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳

发布时间 2020-11-10 23:21

  聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体进行电泳的方法。核糖核酸(ribonucleicacid,RNA)分子在一定pH值的缓冲液中带有电荷,将其放人电场中,则可向与其所带电荷电性相反的电极移动。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛效应,核酸分子大小、形状不同,故在电场作用下,核酸分子在聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同,依此可达到分离纯化的自的。本文详细介绍了RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳,包括聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理,实验所需试剂,实验步骤。

  (1) 20%的单体母液:取重结晶的丙烯酰胺19.0g及甲叉双丙烯酰胺1.0g,蒸馏水溶解,稀释至100mL。

  (1)取玻管(8 cmx0.5 cm)2支,下端用胶布封闭管口,垂直立在试管架上。

  (2)取单体母液3 mL、缓冲液1.5 mL、β- DMAPN0.06 mL、水10 mL混匀,再加过硫酸铵0.94mL,混匀后立郎分装于各管至刻度处,沿玻管加几滴水封面,静置待凝固。

  (1)取少量RNA样品液和RNA标准液分别如人等体积的20%蔗糖和0.2%溴酚蓝待用。

  (2)剥去凝胶管下端胶布,倒出凝胶表面水,用电泳缓冲液洗涤凝胶表面三次,凝胶管内加满缓冲液,插人电泳槽中,上下槽加足电泳缓冲液,每支凝胶管加rna样品10~ 20 μL(含RNA 50~ 100 μg)。

  接通电泳仪电源,上槽接负极,下槽接正极。开始时电流应小一些,以每支凝胶1~2mA为宜。待样品进人凝胶后增加至每支凝胶3mA,调至所需电流并保持。待溴酚蓝迁移至距凝胶管下端2cm处关闭电源停止电泳,取出凝胶管。

  (1)用5mL注射器吸满蒸馏水,安上穿刺针头,针尖紧贴玻管壁,边旋边向凝胶管侧壁注入水剥离凝胶。

  (2)将凝胶放入染色液中染色1 h,再用6% HAc脱色,更换数次脱色液,直到背景清晰,一般需脱色24h。

  (3)将凝胶泡在6%HAc中,取出后在紫外灯下观察,比较不同样品的电泳区带。

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