服务热线
当前位置:主页 > 行业知识 >

选择聚丙烯酰胺凝胶浓度参考值

发布时间 2021-02-07 08:39

  选择聚丙烯酰胺凝胶浓度参考值_化学_自然科学_专业资料。选择聚丙烯酰胺凝胶浓度参考值

  第八章 电泳分离技术 第一节 电泳的基本理论及分类 一、原理 (一)概念及原理 1、电泳:是指带电粒子在电场中向与其自身 带相反电荷的电极移动的现象。 2、原理 电泳技术就是利用在电场作用下,由于 待分离样品中各种分子带点性质以及分子本 身大小、性状等性质的差异,使带电分子产 生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、 鉴定或提纯。 迁移率与带电分子所带净电荷成正比, 与分子的大小和缓冲液的黏度成反比 (二)影响电泳的主要因素 ? ? ? ? ? ? ? 1、大分子的性质 2、电场强度 3、溶液的pH 4、溶液的离子强度 5、 电渗 6、温度 7、支持物的影响 二、分类 (一)按分离原理分类 1、区带电泳 2、自由界面电泳 3、等速电泳 4、等电聚焦电泳 (二)按有无固体支持物分类 1、按有无固体支持物可以分为 两类:自由电泳和支持物电泳。 2、支持物电泳根据所用的支持物不 同又可分为纸电泳、醋酸纤维薄膜 电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺 凝胶电泳(PAGE)、SDS-聚丙 烯酰胺凝胶电泳 第二节 常用电泳分离技术 一、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (一)基本原理 1、凝胶的聚合及孔径 2、电泳效应 (1)连续性电泳系统的凝胶浓度一致,凝胶中的pH值 及离子强度与电泳槽液的相同。 (2)不连续电泳系统存在4个不连续性:凝胶层的不 连续性;缓冲液离子成分的不连续性;pH值的不连 续性;电位梯度的不连续性。4种不连续性,电泳时 会产生3种物理效应,即样品的浓缩效应、凝胶的分 子筛效应以及电荷效应。 (二)影响凝胶聚合的因素 ? 1、试剂质量 ? 2、凝胶浓度 ? 3、温度和氧气的影响 (三)聚丙烯酰胺胶体的制备 制胶模 1 梳形样品槽模板 2 长玻璃板(后面) 3 短玻璃板(前面) 4 U形橡胶框 (四)聚丙烯酸胺凝胶电泳的特点与用途 ? 1、电渗作用比较小 ? 2、凝胶孔径可调 ? 3、电泳分辨率高 ? 4、化学稳定性和热稳定性好 ? 5、机械强度高 二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (一)基本原理 ? 在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基 硫酸钠(SDS),不影响凝胶的形成,不影响蛋白 质的电泳迁移率,因蛋白质的电泳迁移率主要取 决于其自身分子量的大小。 ? SDS能打开蛋白质分子间的氢键和疏水键,使蛋白 质变性成为松散的线状。 ? 同时大多数蛋白质的每个氨基酸能与固定量的SDS 相结合 ,形成SDS–蛋白质复合物 。 (二)SDS-聚丙烯酰胺凝胶胶体的制备 (三)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的优缺点 及应用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有设备简单, 样品用量甚微,操作方便等优点,现已成 为测定大多数蛋白质分子量的常用方法 三、等电聚焦电泳 (一)基本原理 等电聚焦电泳是在电泳槽中放入载体两性 电解质,当通以直流电时,利用两性电解 质形成的一个由阳极到阴极逐步增加的pH 梯度,使不同的酶或蛋白质聚焦于与其等 电点相当的pH值位置而进行分离的电泳技 术。 (二)pH梯度的建立 产生pH梯度的方法通常有两种:一种是用两 种不同pH的缓冲液互相扩散,在混合区形成 pH梯度,称为人工pH梯度。但这种pH梯度 不很稳定,常用于制备电泳。另一种是利用 两性电解质载体(Carrier ampholytes)在电 场的作用下自然形成pH梯度,称为天然pH梯 度。 (三)支持pH梯度的介质 ? (1)梯度溶液 ? (2)凝胶 (四)等电点聚焦电泳的操作过程 ? 1、pH梯度支持介质的制备 ? 2、电泳 ? 3、分离组分的检测 (五)等电聚焦电泳的特点及应用 ? 优点:(1)具有很高的分辨率(2)显现的 区带窄(3)聚焦力强(4)可直接并准确测 出等电点 ? 等电聚焦技术的缺点是:①等电聚焦要求用 无盐溶液,而在无盐溶液中蛋白质可能发生 沉淀;②样品中的成分必须停留在其等电点 处,不适用于在等电点不溶或发生变性的蛋 白质 四、其他电泳技术 (一)琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶可以用于蛋白质和核酸的电泳 支持介质,尤其适合于核酸的提纯、分析 琼脂糖凝胶电泳的分辨率较聚丙烯酰胺凝 胶电泳差一些,但在分离范围上优于聚丙 烯酰胺凝胶电泳,并有便于制备和操作的 优点 (二)醋酸纤维素薄膜电泳 ? 用醋酸纤维素条带或塑料薄膜做支持物来进 行的电泳特点是分离快速,在低电压下,仅 0.5~2h,分离出来的区带非常清晰鲜明,背 景完全无色,操作方便,加上不会像纸电泳 那样,造成蛋白质的变性,所以醋酸纤维素 已在多种用途上完全取代滤纸电泳,而得到 比滤纸电泳更理想的结果,醋酸纤维素溶解 在丙酮里,被分离的区带就可以用比色计测 定,非常准确 选择聚丙烯酰胺凝胶浓度参考值 适宜的凝胶浓度 (T%) 20~30 15~20 10~15 5~10 2~5 样品 分子量范围 104 (1~4)×104 4×104~1×105 1×105~5×105 5×105 蛋白质(酶) 核酸(RNA) 104 104~105 1×105~2×106 15~20 5~10 2~3.6 制胶模 1 梳形样品槽模板 2 长玻璃板(后面) 3 短玻璃板(前面) 4 U形橡胶框 Tris-HCl 凝胶浓度 凝胶孔径 类型 样品胶 浓缩胶 分离胶 pH 6.7 pH 6.7 pH 8.9 3% 3% 7.5% 大(大孔凝胶) 大(大孔凝胶) 小(小孔凝胶) 不连续电泳三层凝胶的性质 不连续凝胶电泳示意图 等电聚焦电泳槽

nba在线观看免费回放-官网

联系人:李经理 座机:400-0573147 地址:河南省濮阳市巩义市夹津口工业园
微信二维码